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    5-11

    RNA提取原理RNA提取时,加lv仿后分三层:水相(含rna,可能还有少量DNA),中间白色薄层(应该是蛋白和DNA),下层有机相(lv仿和蛋白等)lv仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,lv仿可以有效的使有机相和无机相开元旗牌分离。DNA提取过程有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和DNA脱离,DNA进入水相。但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离,否则DNA会释放到水相。不管有酚也好,没有酚也好,lv仿本身也对蛋白有变性作用,剧烈的震荡,很容易使得DNA的...

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    4-23

    溶葡球菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramideglycanohydrlase),是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键,使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合,与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐,使病毒失活。因此,该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。...

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    4-3

    RNA甲基化(RNAmethylation)是一类表观遗传修饰,在已经发现的超过100种不同的RNA化学修饰中,主要有6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)、5-甲基胞嘧啶(C5-methylcytidine,m5C)和1-甲基腺嘌呤(N1-methyladenosine,m1A)。RNA甲基化在调控基因表达、编辑、稳定性及降解等方面扮演重要角色。早在20世纪70年代,人们已经在真核生物的mRNA和lncRNA中发现了m6A修饰。但受制于技术的局限性,...

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    3-18

    慢病毒包装简要程序:以六孔板中的1孔为例,每个样品需要1×10∧6个293FT细胞。1、取1.5ml灭菌EP管,加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清OptiMEM。轻柔混匀,室温孵育5min。2、取1.5ml灭菌EP管,取9μl脂质体2000l溶于250μl无血清Opti-MEMI培养基中。轻柔混匀,室温孵育5min。3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min4、用胰酶消化并记数293FT细胞。用含血清的DMEM培养基重悬细胞。5...

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    2-20

    一、自噬诱导剂(1)BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin:模拟内质网应激(2)Carbamazepine/L-690,330/LithiumChloride(氯化锂):IMPase抑制剂(即Inositolmonophosphatase,肌醇单磷酸酶)(3)Earle's平衡盐溶液:制造饥饿(4)N-Acetyl-D-sphingosine(C2-ceramide):ClassIPI3KPathway抑制剂(5)Rapamycin:mTOR抑...

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    1-8

    巴氏芽孢杆菌在水产上也算是用得比较多了,能够肥水、净水、降解氨氮、亚盐等有害物质。这些芽孢的作用大家都清楚,水质恶化、底质恶化等都能使用芽孢来改善,可是你知道为什么这小小的细菌,却有这么大的用途吗?其实上面这些用途都是芽孢的一个能力引申出来的——分解。先说肥水,为什么芽孢能肥水?细菌也会在塘里生长,不会抢夺藻类的营养吗?首先藻类是不能直接利用有机物的,像残饵、粪便、尸体等都无法成为藻类生长的助力,而芽孢会将有机质分解为无机物,这样植物就能直接利用这些营养成分了,从而达到肥水的...

  • 2019

    12-27

    细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下:1、细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够!尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意!下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象!可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮...

  • 2019

    12-18

    常见菌类污染情况图片1.杆菌常见的有大肠杆菌,长度通常在2-5um左右。2.球菌常见的有葡萄球菌,直径通常在1-2um左右。3.霉菌常见的有毛霉,菌丝宽2-10um左右,长度短则几十um,长则可达几mm。以上3种是细胞培养过程中常见的菌类污染,其共性是增殖快,适应能开元旗牌,很难*,一般如果确认培养细胞有以上污染,建议尽快丢弃,并检查相关试剂和培养箱是否有污染,确认没有后再重新复苏。那么细胞如果还是不幸污染了,那又该怎么办呢?我把细胞污染分为早期和晚期两种。早期污染是细胞状态变差...

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